Объявление

Свернуть
Пока нет объявлений.

Анатомия листьев Aloe erinacea

Свернуть
X
  • Фильтр
  • Время
  • Показать
Очистить всё
новые сообщения

  • Анатомия листьев Aloe erinacea

    Научное название рода Aloe ввёл Карл Линней в 1753 году. По данным разных авторов род Aloe (Алоэ) включает 350-500 видов. Ранее род Aloe включали в семейства лилейных, асфоделовых. В настоящее время выделено отдельное семейство – Aloaceae.


    Aloe erinaceaэндемик Намибии. Данный таксон в 2004 году включён в Приложение II CITES (находящиеся под угрозой исчезновения). Несмотря на то, что этот вид встречается на территории около 5000-15000 квадратных км, популяции изолированы друг от друга, субпопуляция насчитывает всего около 350-400 растений (по данным Jankowitz).

    систематика:
    Класс: Liliopsida, Monocotyledones (Однодольные)
    Порядок: Liliales
    Семейство: Aloaceae
    Род: Aloe
    Вид: Aloe erinacea D.S. Hardy

    синоним: Aloe melanacantha var. erinacea (D.S.Hardy) G.D.Rowley

    Этимология: melanos (греч.) – чёрный, acantha (греч.) – колючка, erinaceus (лат.) – ежевидно-колючий

    Произношение с ударением: Алоэ меланакАнта вариетас эринАцэа

    Материалы, оборудование.
    Фиксированные кусочки листьев Aloe erinacea.
    Реагенты.
    Красители фирмы Chroma (в кристаллической форме): Acridinrot, Acriflavin, Astrablau. Дистиллированная вода, 3% перекись водорода, этиловый спирт разной концентрации (70%, 50%, 30%), изопропиловый спирт 99, 7%, формалин (40%), ледяная уксусная кислота(99.5%), IsoPrep, монтирующая среда Euparal.
    Оборудование.
    Фотокамера Nikon Coolpix 4500 с оптико-механическим адаптером, микроскопы Jenamed 2 (Carl Zeiss Jena), Микмед 2, МБС-2, цилиндрический микротом, одноразовые лезвия, окуляр-микрометр МОВ-15х, часовые стёкла, чашки Петри, предметные и покровные стёкла, кисточки, препаровальные иглы, термостат.


    Фото 1. Aloe erinacea из моей коллекции



    Фото 2. Aloe erinacea, линиями отмечены места поперечных срезов


    Фото 3. Обзор: макрофото поперечного среза толщиной 200 µm, срез нативный (без фиксации и окраски)

    Ширина среза около 8 мм. Условные обозначения тканей на фото.
    Некоторые дополнения: секреторные клетки – в данном случае это алоиновые клетки. Алоин – это алкалоид, обнаруженный у представителей рода Алоэ (придаёт желтоватый оттенок клеточному соку).
    Водоносная паренхима (слизевые клетки) находится в средней части листа.


    Фото 4. Поперечный срез листа толщиной 50 µm, без фиксации и окраски, фото через стереомикроскоп МБС-2. Ширина среза около 10 мм.



    Рабочий план по проводке и окраске тканей растений(по Михальцову, 2011):

    1.Приготовление рабочих растворов красителей: Acridinrot – 1% раствор в 50% этаноле; Acriflavin и Astrablau – 1% раствор в дистиллированной воде с добавлением кристаллика тимола.
    2.Свежие кусочки листьев длиной 10 мм фиксировали в фиксаторе FCA (70% этиловый спирт, формалин, ледяная уксусная кислота, 100:7:7). Содержание объектов в фиксаторе 5 суток.
    3.Промывка объектов в 70% этаноле до исчезновения запаха уксусной кислоты. Хранение объектов в 70% этаноле.
    4.Поперечные срезы листа толщиной 30-50 µm получены на цилиндрическом микротоме с использованием одноразовых лезвий фирмы Leica и держателя одноразовых лезвий SHK (разработан германскими пенсионерами-микроскопистами).
    5.Срезы промывают в 70% этаноле 3 минуты.
    6.Срезы промывают в 50% этаноле 3 минуты.
    7.Срезы промывают в 30% этаноле 3 минуты.
    8.Промывка срезов в дистиллированной воде по 1 минуте в трёхкратной повторности.
    9.Отбеливание срезов в растворе дистиллированной воды и 3% перекиси водорода (100:20) - 1 минута.
    10.Двухкратная промывка срезов в дистиллированной воде.
    11.Окраска срезов в красителях: метод полихромной окраски растительных тканей по Wacker, модифицированный нами: Acridinrot – окраска 7-10 минут, промывка в дистиллированной воде; Acriflavin – окраска 7-10 секунд под наблюдением в стереомикроскоп, промывка в дистиллированной воде; Astrablau – окраска 2-5 минут.
    12. Двухкратная промывка срезов в дистиллированной воде по 1 минуте.
    13. Дифференциация окраски в растворе 70% этанола с соляной кислотой (100:2) – 10 секунд.
    14.Трёхкратная промывка срезов в дистиллированной воде.
    15.Обезвоживание тканей в IsoPrep (Isopropylalkohol 99,7 %, + Triton X-15) или 100% изопропаноле по схеме: 10 секунд – смена раствора; 30 секунд – смена раствора; 3 минуты – смена раствора; 5 минут в растворе.
    16.Помещение срезов в монтирующую среду Euparal на предметном стекле, срезы покрыть покровным стеклом.
    17. Поместить груз на покровное стекло (чтобы вытеснить воздух), препараты поместить на 4-5 суток в термостат с температурой t=40-45 С.


    Фото 5. Поперечные срезы листа толщиной 30-50 µm после процедуры фиксации, окраски, проводки тканей перед заключением в монтирующую среду

    Напомним: 1 µm (микрометр, мкм) равен 10 в минус шестой степени метра или 10 в минус третьей степени миллиметра. Если проще, то мысленно разделите 1 мм на 1000 частей – одна часть будет равна 1 микрометру.

    Фото 6. Обзор: окрашенный поперечный срез толщиной 50 µm и шириной около 9 мм

    Микрофото выполнено при общем увеличении микроскопа 32х (объектив 3,2х)
    Примечание: в данном случае паренхима – это паренхима коры (не путать с корой древесных пород), включающая хлоренхиму (фотосинтезирующая ткань). Паренхимные клетки – это клетки размеры, которых в разных направлениях одинаковы или их длина немного больше ширины.


    Фото 7. Обзор: Эпидерма, кутикула. Увеличение 400 x

    Эпидермальные клетки имеют метакутинизированные наружные оболочки. Кутикула с папиллами, высота кутикулы от 60 до 85 µm.
    Устьица мелкие, погруженные, средние размеры замыкающих клеток устьица: ширина 20,5 µm, высота 30 µm. На микрофото видно, что замыкающие клетки имеют кутикулярный клювик, выполняющий защитную функцию и роль «замка». Замыкающие клетки имеют крупное ядро и хлоропласты. Средние размеры побочных клеток (сателлиты): ширина 48 µm, высота 83 µm. Устьичная щель закрыта - CAM –тип метаболизма (Crassulacean Acid Metabolism)



    Фото 8. Обзор: паренхима, эпидерма, кутикула. Увеличение 250 x


    Фото 9. Обзор: паренхима, эпидерма, кутикула. Увеличение 250 x, поляризованный свет с компенсатором лямбда

    Обратите внимание на сросшиеся побочные клетки.


    Фото 10. Обзор: паренхима, эпидерма, кутикула. Увеличение 125 x, поляризованный свет с компенсатором лямбда
    Вложения

  • #2
    Фото 11. Обзор: эпидерма, кутикула. Увеличение 400x, поляризованный свет с компенсатором лямбда

    Обратите внимание, как кутикула преломляет свет.

    Фото 12. Обзор: паренхима. Увеличение 125x

    В паренхиме обнаружено большое количество кристаллов оксалата кальция – стилоиды.
    Средние размеры кристаллов: ширина 25 µm, длина 50 µm.


    Фото 13. Обзор: паренхима. Увеличение 250x


    Фото 14. Обзор: паренхима, кристаллы оксалата кальция. Увеличение 250x, поляризованный свет с компенсатором лямбда

    Стилоиды – это крупные кристаллы оксалата кальция, находящиеся в вакуолях. Зачастую стилоиды разрывают оболочку клетки и создаётся впечатление, что стилоиды находятся в межклетниках.

    Фото 15. Обзор: паренхима. Увеличение 1000x


    Фото 16. Обзор: паренхима. Увеличение 1000x

    В паренхиме обнаружено малое количество межклетников (см. фото, также на фото видны сдавленные клетки), что препятствует внутреннему испарению. Слабая транспирация не способствует терморегуляции, поэтому такие растения жаростойки.

    Фото 17. Обзор: секреторные клетки. Увеличение 125x

    Эти срезы без дифференциации окраски смесью этанола, подкисленного соляной кислотой. Таким образом, мы добились более чёткой картины секреторных клеток.
    У представителей рода Алоэ это алоиновые клетки, имеющие большие размеры – диаметр до 350 µm (!).


    Фото 18. Обзор: проводящий пучок, секреторные клетки. Увеличение 125x

    Алоиновые клетки находятся выше флоэмы

    Фото 19. Обзор: проводящая система, секреторные клетки. Увеличение 250х

    Проводящая система слабо развита, в ксилеме всего несколько трахеид.


    Фото 20. Обзор: клетки шипов. Увеличение 1000x

    На микрофото представлены клетки основания молодого шипа (на растении такие шипы имеют беловатый оттенок). Это живые проземхимные клетки, имеющие вторичное утолщение клеточной оболочки и множество пор.
    Вложения

    Комментарий


    • #3
      Фото 21. Обзор: клетки шипов. Увеличение 400x

      Это клетки шипов, имеющих почти чёрный оттенок. Клетки прозенхимные, мёртвые, с вторичной клеточной оболочкой.


      Фото 22. Обзор: эпидермальные клетки шипов. Увеличение 400x, поляризованный свет с компенсатором лямбда

      В этих клетках уже не видны ядра, клетки мёртвые.
      Вложения

      Комментарий

      Обработка...
      X